BRAF检测对样本的要求高吗？—— 一份来自检验科医生的专业解析

当一份结直肠癌患者的组织标本送到我们检验科，医生在申请单上勾选了“BRAF V600E突变检测”时，我们心里立刻会绷紧一根弦。这根弦，关乎样本的质量。BRAF检测对样本的要求高吗？ 答案是肯定的，而且这种“高要求”贯穿于从患者身上取材到最终出具报告的每一个环节。一个不合格的样本，即便使用最精密的检测仪器，也可能得出误导性的“假阴性”结果，直接影响患者的治疗决策。今天，我们就来拆解一下，这份“高要求”究竟高在何处。

样本类型对比：组织样本 vs. 液体活检，谁对要求更“苛刻”？

谈到BRAF检测应该选择组织样本还是血液样本，这本身就是一道关于“要求”的选择题。目前，肿瘤组织仍是检测的“金标准”，但它对样本本身的质量极为挑剔。理想的组织样本需要包含足够比例、活性良好的肿瘤细胞。如果活检取到的主要是坏死组织、间质或正常黏膜，那么后续检测很可能失败。临床上有时会遇到内镜活检组织过小、或穿刺样本中肿瘤细胞稀少的情况，这直接拉高了BRAF检测对样本的要求。

液体活检，即检测血液中的循环肿瘤DNA（ctDNA），为无法获取合格组织的患者提供了可能。但它有另一套“高要求”逻辑：它对血液采集管的类型（通常需专用cfDNA管）、采血后的处理速度（必须在规定时间内离心分离血浆）、以及血液中ctDNA的浓度有严格规定。晚期肿瘤患者血浆ctDNA含量可能较高，但早期患者或治疗后患者，ctDNA丰度可能很低，检测灵敏度面临挑战。所以，两者要求的侧重点不同：组织要求“质优”，液体活检要求“速快”且“量足”。

组织样本质量深度对比：肿瘤细胞含量与坏死/降解谁影响更大？

深入到组织样本内部，有两个“敌人”会严重影响BRAF检测结果。第一个，也是最关键的，就是肿瘤细胞含量。经常有临床医生问，BRAF检测肿瘤细胞含量需要达到多少？基于PCR或NGS等主流技术，实验室通常要求显微镜下评估的肿瘤细胞比例不低于20%。为什么？因为突变检测本质上是“大海捞针”，要在所有DNA片段中找到那部分属于肿瘤细胞的、并且恰好发生了V600E突变的序列。如果肿瘤细胞占比太低，突变信号可能被大量正常细胞的DNA背景“淹没”，导致检测不到。这不是仪器不够灵敏，而是样本的“基础条件”没达标。

第二个“敌人”是组织的坏死与降解。这往往发生在样本离体后到固定前的“空窗期”。组织离体后若未及时浸泡在固定液中，细胞会开始自溶，DNA也会迅速降解成碎片。你用一堆破碎的DNA片段去做检测，成功率可想而知！即便及时固定，如果使用非中性福尔马林、或者固定液量不足、固定时间过长，也会引起DNA交联过度，影响后续的DNA提取质量。因此，一份新鲜、及时且规范固定的标本，是成功检测的隐形基石。

前处理流程对比：固定与切片环节，哪个环节更易出问题？

从手术室或内镜中心送来的标本，到成为检验科仪器上的一个检测点，中间经历了复杂的“旅程”。其中，固定和切片是两个最容易引入问题的环节。

固定是第一步，也是决定性的。标本必须立即浸入足量（通常是标本体积的10倍）的10%中性缓冲福尔马林中。现实工作中，偶尔会遇到标本被遗忘在器械台、或者用盐水纱布包裹送来等情况，这些都会导致组织自溶。固定不充分，后续一切努力都可能白费。

到了病理科，进行BRAF检测的病理切片如何准备就变得至关重要。病理医生需要在HE染色切片上，精确地圈出肿瘤细胞最密集、活性最好的区域。这个标记区域，就是后续要从石蜡块上切下来用于提取DNA的“目标”。如果切片时切错了区域，切到了旁边的正常组织或坏死区，即使前面所有步骤都完美，检测也会失败。因此，一份合格的BRAF检测报告，背后是病理医生精准的形态学评估和技师精细的切片技术。

与其他基因检测对比：BRAF检测的要求是否格外特殊？

在结直肠癌的基因检测谱系里，BRAF常常与KRAS、NRAS、MSI等一起被提及。那么，BRAF检测和KRAS检测对样本要求一样吗？

从DNA质量的角度看，基于PCR或NGS的BRAF突变检测，其对DNA完整性、纯度和肿瘤细胞含量的要求，与KRAS、NRAS检测是高度一致的。因为它们本质上都是在检测DNA层面的点突变。当实验室进行包含多个基因的NGS检测套餐时，样本质量的门槛是以其中最“挑剔”的检测项目来衡量的，通常需要满足所有检测项目的共同要求。

但与MSI检测相比，情况略有不同。MSI（微卫星不稳定性）检测除了可以用NGS方法（同样需要好DNA）外，还可以通过免疫组化（IHC）法检测错配修复蛋白（MMR）的表达。IHC对DNA完整性的依赖度相对较低，它更看重组织结构的保存和抗原的完整性。因此，对于部分固定稍久或DNA略有降解（但仍能看清细胞形态）的样本，IHC可能还能做，但基于DNA的BRAF突变检测就可能已经失效了。这从一个侧面印证了，BRAF检测对样本的要求，特别是对DNA质量的要求，是相当严格的。

总结与建议：如何确保送检样本满足BRAF检测的高要求？

绕了一大圈，我们回到最初的问题：BRAF检测对样本的要求高吗？ 现在我们可以更清晰地回答：它的要求确实高，这种高要求是系统性的，体现在对肿瘤细胞含量、组织新鲜度、前处理规范性以及DNA质量的综合把控上。任何一个环节的疏漏，都可能成为检测失败的“阿喀琉斯之踵”。

那么，我们能做些什么来确保成功呢？
对于临床医生和病理科同仁：请务必重视标本的“第一公里”。手术或活检后立即规范固定，是送给检测最好的“礼物”。送检前，病理医生的显微镜下评估和精准标记不可或缺，这是将有限样本价值最大化的关键步骤。在申请检测时，与检验科保持沟通，明确样本情况，对于质量存疑的样本可以提前讨论备选方案（如考虑液体活检）。

对于患者和家属：或许可以这样理解，一次精准的基因检测，始于一台成功的手术或活检，但更依赖于后续一系列看不见的、严谨的处理流程。信任您的主治医生和医疗团队，了解合格样本对精准医疗的重要性，本身就是治疗的一部分。

精准医疗，检测先行；精准检测，样本为基。当我们共同守护好样本质量这条生命线，BRAF检测报告上的每一个字符，才能真正承载起指导治疗、预测预后的重量。让我们从重视手头的那一份组织标本开始，为结直肠癌患者的个体化治疗之路，铺好第一块坚实的砖。