在非小细胞肺癌的精准治疗时代，ROS1基因融合的检测结果，直接决定了患者能否从对应的靶向药物中获益。然而，临床实践中，并非每一次检测都能顺利给出明确的答案。“检测失败”、“结果不明确”或“假阴性”的报告，时常让患者和医生感到困惑与焦虑。系统性地理解ROS1检测失败的原因有哪些，是跨越这一障碍、确保治疗精准性的第一步。
样本因素：是“巧妇难为无米之炊”，还是“材料本身不合格”？
一切精准检测的基石，是合格的样本。如果把检测比作一次精密的化学实验，那么肿瘤样本就是最核心的原料。原料出了问题，再先进的技术也难有作为。
最常见的问题出在“量”上。通过支气管镜或穿刺获取的活检标本，有时体积非常小，其中包含的肿瘤细胞数量可能低于检测平台所需的最低阈值。比如，一些高通量测序（NGS）平台要求肿瘤细胞含量至少达到20%甚至更高。如果一份标本里混入了大量正常的炎症细胞或间质细胞，肿瘤细胞的DNA比例过低，就可能导致检测信号微弱，无法被有效捕获和分析，最终被判读为“检测失败”。
“质”的问题同样关键。肿瘤组织离体后，需要迅速用福尔马林等固定液进行处理，以保存其核酸的完整性。但如果固定不及时，或者固定时间过长，组织中的DNA和RNA会发生降解。ROS1融合的检测，尤其是基于RNA的检测方法（如RT-PCR、部分NGS panel），对RNA的质量极为敏感。降解的RNA就像一本残缺不全的指令书，机器无法读取其中的关键信息（融合位点），自然会导致ROS1检测失败。临床上，我们偶尔会收到来自不同医院的标本，处理规范的与处理随意的，最终的检测成功率确实存在肉眼可见的差异。
技术因素：是“检测方法选择不当”，还是“平台灵敏度不够”？
即便拿到了好样本，选择什么样的“工具”去检测，也直接决定了成败。目前，检测ROS1融合有多种技术，各有优劣，没有一种方法是万能的。
免疫组化（IHC）有时被用作初筛，因为它快速、经济。但它的特异性不够高，染色结果容易受到主观判读影响，可能出现假阳性（不是融合但染色阳性）或更危险的假阴性（是融合但染色阴性）。因此，IHC阳性结果通常需要分子检测方法来确认，而阴性结果绝不能轻易排除ROS1融合的可能性。
荧光原位杂交（FISH）是传统的“金标准”，但它主要依赖于设计好的特异性探针去识别断裂的基因。如果患者的ROS1融合伴侣是非常罕见的基因，或者断裂点发生在探针覆盖范围之外，FISH就可能“看不见”这种融合，造成漏检。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）灵敏度高，但它只能检测已知的、设计好的融合类型，对于全新的、未知的伴侣基因同样无能为力。
近年来广泛应用的下一代测序（NGS），尤其是基于RNA的NGS，在覆盖范围和发现未知融合方面优势明显。但它也受限于panel的设计广度、测序深度以及生信分析的准确性。不同厂家、不同平台的试剂盒，其灵敏度和特异性存在差异。甚至，从样本中提取核酸这一步做得不好，后续的扩增和测序都会成为无源之水。所以，ROS1检测失败的原因有哪些？检测技术本身的局限性和操作流程中的任何细微偏差，都可能位列其中。
生物学与人为因素：是“肿瘤异质性作祟”，还是“环节沟通有疏漏”？
有些导致失败的因素，藏得更深，与肿瘤本身的狡猾特性和医疗流程的复杂性有关。
肿瘤异质性是一个巨大的挑战。肺癌不是一个均质的肿块，它内部可能包含多个基因型不同的细胞亚群。穿刺活检，就像在茫茫大海中取一瓢水，如果这一瓢恰好取自没有ROS1融合的细胞群体，那么检测结果就会是阴性，尽管患者体内其他部位可能存在ROS1融合的肿瘤细胞。这就是所谓的“取样误差”。更棘手的是，肿瘤在治疗压力下会进化，最初没有融合的克隆可能增殖，导致再次活检时结果发生变化。
另一个较少被讨论但真实存在的原因是融合类型本身。绝大多数ROS1融合是CD74-ROS1，但还有一小部分患者是与其他罕见基因融合。如果检测方法（特别是FISH和RT-PCR）没有针对这些罕见类型设计探针或引物，结果自然是阴性。这在临床上会给医生造成“患者没有靶点”的误解。
人为和流程因素也不容忽视。一份从临床科室送出的标本，需要经过申请、采集、固定、运输、登记、前处理、检测、分析、报告等多个环节。任何一个环节的信息遗漏（如申请单未明确标注需做ROS1检测）、交接失误或保存不当，都可能导致样本用错、信息错配或样本失效。病理科医生与临床医生的沟通不畅，也可能使得对临界结果的判读失去临床背景的支撑。这些看似低级的错误，恰恰是部分检测失败事件的直接导火索。
面对ROS1检测失败，我们该如何应对？
理清了原因，对策也就清晰了。当面临一次失败的ROS1检测时，消极等待不可取，系统性的再评估才是正解。
首要任务是评估样本的“可再检性”。如果留存的组织蜡块中肿瘤细胞含量尚可，可以考虑换用另一种原理的检测技术进行复测。例如，初次用FISH检测失败或阴性，但临床高度怀疑，可以用基于RNA的NGS进行验证。NGS广覆盖的特性，尤其适合排查罕见融合。
如果原样本已无法使用，获取新的肿瘤样本就成为关键选择。这可以是再次穿刺活检，或者在多学科讨论后，考虑对可及的转移灶进行活检。近年来，液体活检（检测血液中的循环肿瘤DNA）技术日益成熟，为无法再次获取组织样本的患者提供了宝贵的补充手段。虽然其对于融合变异的检测灵敏度通常低于组织检测，但对于监测耐药、发现新克隆具有独特价值，有时也能在组织检测失败后提供关键线索。
整个过程必须依托于紧密的多学科协作。临床医生提供详细的病史和治疗情况，影像科医生精准定位可活检的病灶，病理科医生精心处理和分析样本，分子病理专家选择合适的检测平台并解读复杂的报告。只有团队无缝合作，才能为患者编织一张精准的检测安全网。
展望未来，检测技术必将更加灵敏、全面和便捷。但无论技术如何进步，对检测失败原因的深刻理解，以及对高质量样本的追求，永远是精准医疗的基石。每一次对失败原因的追溯，不仅是为了给当前的患者找到答案，也是在推动整个诊疗体系的优化。最终目标是让每一位带有ROS1融合的肺癌患者，都不再因为检测的障碍，而错过本该有效的治疗机会。
